[本篇论文由上帝论文网为您收集整理，上帝论文网http://paper.5var.com将为您整理更多优秀的免费论文，谢谢您的支持]         张 翼，杨玉莲，郭 莹，欧柏青，宁忠平，骆阳平，崔 波，唐铭强，付庆华    【摘要】  目的  探讨腺苷是否能诱导急性冠脉综合征（ACS）患者外周血单核细胞中血管内皮生长因子（VEGF）的表达。方法  分别抽取80例ACS患者发病后第1天的外周静脉血，随机分为4组，每组20例，对外周血单核细胞进行分离、培养，其中3组分别加入腺苷10μg、100μg、1000μg培养。用酶联免疫吸附法（ELISA）测定VEGF浓度。结果  ACS患者VEGF水平随着培养时间的延长而增加，在腺苷10μg组与对照组同时程比差异无显著性（P＞0.05）。VEGF水平在腺苷100μg组和1000μg组均显著高于同时程对照组（P＜0.05，P＜0.01），与腺苷浓度和作用时间成正比。结论  腺苷能诱导ACS患者外周血单核细胞中血管内皮生长因子表达且与浓度和作用时间成正比。        【关键词】  腺苷；急性冠脉综合征；外周血单核细胞；血管内皮生长因子        【Abstract】  Objective  To investigate expression of vascular endothelial growth factor by peripheral blood mononuclear cells with adenosine in patients with acute coronary syndrome.Methods  80 patients with acute coronary syndrome(ACS) were used for this study.Peripheral blood mononuclear cells，(PBMCs) were isolated from peripheral blood on the 1st day after the onset of ACS.PBMCs were cultured with normal sodium (control group) and adenosine 10μg，100μg，1000μg for 6h，12h，24h.Vascular endothelial growth factor (VEGF) levels in the culture media were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Results  VEGF levels in the cultured medium of PBMCs after incubation of 6h，12h，24h these group were significantly higher (P＜0.05，P＜0.01)，but in adenosine 10μg group were insignificant.Conclusion  This study showed that adenosine can induce the expression of vascular endothelial growth factor by peripheral blood mononuclear cells in patients with acute coronary syndrome.VEGF levels were increased gradually along with the action time and concentration of adenosine.        【Key words】  adenosine；acute coronary syndrome；peripheral blood mononuclear cells；vascular endothelial growth factor        目前应用血管生长基因来促进缺血心肌血管再生，即分子搭桥的方法在治疗急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS)方面正日益受到重视，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）已被证实［1，2］能促血管生成，重建冠状动脉侧支循环形成，改善心功能。研究发现［3］急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）患者左室收缩功能改善与外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）源性VEGF呈正相关。腺苷（adenosine，Ado）被公认为能使缺血心肌［4］产生药理性预适应，对缺血心肌有保护作用，但是否通过诱导PBMCs表达VEGF来参与保护缺血心肌？目前国内外未见报道。本试验旨在探讨腺苷是否能诱导ACS患者PBMCs中VEGF表达。    1  对象与方法    1.1  研究对象  患者来源于2003年9月~2004年9月在我院心内科住院并确诊为急性冠脉综合征的患者共80例，AMI 24例，不稳定型心绞痛56例。其中男47例，女33例；年龄42~86岁，平均年龄（62.7±10.9）岁。所有患者均常规服用阿司匹林、β-受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、他汀类调脂药。入选者随机分为4组，每组20例（AMI 6例，不稳定型心绞痛14例），4组患者在年龄、性别、冠心病危险因素方面差异无显著性，具有可比性。合并严重心衰、肝、肾功能衰竭、感染性疾病、肿瘤、外周血管病、脑卒中者予以剔除。    1.2  研究方法    1.2.1  PBMCs分离  在ACS患者发病后的第1天抽取20ml静脉血放入肝素抗凝离心管内，用淋巴分离液分离出单核细胞，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养液重悬单核细胞，并将细胞浓度调节至5×106/ml。    1.2.2  PBMCs培养及标本的提取  分别从4组中各取1ml浓度为5×106/ml PBMCs悬液放入24孔培养板中，将生理盐水1ml（对照组）、Ado10μg/ml（试验1组）、Ado 100μg/ml（试验2组）、Ado 1000μg/ml（试验3组）分别加入4组PBMCs培养板中，在37℃、5%CO2条件下于培养箱中进行细胞培养。分别于6h、12h和24h收取PBMCs培养的上清液置于-70℃冰箱保存待测。 1.2.3  VEGF的测定  单核细胞培养分泌的VEGF量均采用ELISA法测定，浓度单位为pg/ml。试剂盒由北京晶美生物工程有限公司提供，检测灵敏度为30pg/ml，批内、批间误差均＜9.5%。按试剂盒说明进行操作。    1.2.4  统计学方法  应用SPSS 10.0软件包进行统计分析，各统计指标以均数±标准差（x±s）表示。计量资料的组间比较采用t检验，P＜0.05具有统计学意义。    2  结果        PBMCs培养产生的VEGF在不同培养时间段呈动态变化，结果见表1。从表1中可见VEGF水平随着培养时间的延长而逐渐增加。试验1组与对照组同时程比VEGF水平差异无显著性（P＞0.05），试验2组和试验3组VEGF水平显著高于同时程对照组（P＜0.05、P＜0.01）。试验2组VEGF水平显著高于同时程试验1组（P＜0.05），试验3组VEGF水平显著高于同时程试验2组（P＜0.05）。         表1  ACS患者PBMC-VEGF水平的变化  （x±s，pg/ml）        注：与对照组同时程比较，t≥2.187，*P＜0.05；t≥2.673，**P＜0.01；与试验1组比较，t≥2.329，△P＜0.05；与试验2组比较，t≥2.042，#P＜0.05    3  讨论        腺苷是一种内源性嘌呤核苷酸，由腺嘌呤和戊糖结合而成，其作用是通过激活受体机制和非受体机制实现。Ado受体存在于大多数细胞膜上，其中A1和A2受体与心血管作用关系密切。有报道［5］血管内皮细胞膜上存在Ado-A2B受体，能调节VEGF生成。本研究发现Ado能诱导ACS患者外周血单核细胞VEGF的表达，提示ACS患者外周血单核细胞膜上存在Ado受体，能调节VEGF生成。        大量研究证实Ado对缺血心肌的保护作用，AMI患者再灌注损伤的减轻及梗死范围的减少多是通过其缺血预处理来实现的［6］。现今发现Ado能上调ACS患者外周血单核细胞VEGF的表达，其表达的量与Ado的作用剂量和持续时间成正比。目前已证实［7］VEGF的持续高表达能刺激缺血区冠状动脉侧支循环形成，使受损的血管内皮细胞再生，恢复内皮细胞的完整性和功能，增加缺血区血流灌注，抑制缺血、梗死范围，改善心脏收缩功能。而单核细胞分泌的VEGF在促进AMI患者缺血区侧支循环建立、改善左室收缩功能方面起重要作用［8］。本研究结果提示Ado除了通过药理性预处理来保护缺血心肌外，还可能通过上调外周血单核细胞VEGF的表达来保护缺血心肌。        综上所述，Ado能上调ACS患者外周血单核细胞VEGF的表达，其表达的量与Ado的作用剂量和持续时间成正比，对保护缺血心肌将产生重要作用。                             【参考文献】    1  Sato K，Wu T，Laham RJ，et al.Efficacy of intracoronary or intravenous VEGF165 in a pig model of chronic myocardial ischemia.J Am Coll Cardiol，2001，37(2)：616-623.2  Lathi KG，Vale PR，Losordo DW，et al.Gene therapy with vascular endothelial growth factor for inoperable coronary artery disease：anesthetic management and results.Anesth Analg，2001，92：19-25.3  张翼，祁述善，周胜华，等.急性心肌梗死患者外周血单核细胞中血管内皮生长因子的表达.中国心血管杂志，2003，8（3）：179-181.4  Donato M，Gelpi RJ.Adenosi

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