[本篇论文由上帝论文网为您收集整理，上帝论文网http://paper.5var.com将为您整理更多优秀的免费论文，谢谢您的支持]           作者：李忠仁，沈梅红，穆艳云，欧阳颀，马骋【摘要】  目的  探索临床针刺加当归芍药散(DGSYS)治疗阿尔采默氏症的可能机理。方法  通过腹腔注射药物东莨菪碱或亚硝酸钠，或者用奎宁酸损毁大脑海马CA1区诱发大鼠发生记忆力障碍，造成不同类型的大鼠“痴呆”模型，对照性观察针刺、针刺加DGSYS、DGSYS及NM对记忆障碍功能的影响和与记忆相关实验指标参数的变化。结果  针刺加DGSYS疗法抗痴呆作用机制可能与调节大脑兴奋性氨基酸Glu能和胆碱能神经递质的功能，改善体内抗氧化系统的能力，如改善超氧化物歧化酶/脂质过氧化物含量及一氧化氮/一氧化氮合酶的活性比值有关，它们的协调作用促使了大脑及海马CA1区受损的痴呆模型的LTP增强、大鼠学习记忆能力的复苏，从而改善了痴呆症状。结论  针刺加DGSYS疗法治疗AD痴呆及改善学习记忆能力的作用具有确切的科学依据，值得临床推广应用。    【关键词】  针灸  当归芍药散  阿尔茨海默症  痴呆造模  神经递质  抗氧化作用  长时程增强    The studies on mechanism of Alzheimer’s disease by the acupuncture treatment combined with Danggui Shaoyao San of TCM    【Abstract】  Objective  To explore into the probable mechanism of Alzheimer’s disease (AD) by the acupuncture treatment combined with DGSYS of TCM.Methods  Three kinds of model rats with dysmnesia which were made by injected into drug of scopolamine or NaNo2 in the abdomen separately and injured at the hippocampal CA1 in brian by drug of quinolinic acid  treated by single acupuncture or acupuncture combined with DGSYS of TCM or DGSYS of TCM were observed separately， to compare different influence on dysfunctions of acuquisition and consolidation of memory induced by drugs and injure with nimodipine (NM) or the normal rats.Results  The group in which rats treated by acupuncture combined with DGSYS of TCM has better acquisition and consolidation of memory， which is significant difference. The possible mechanism is associated with the regulation of the glutamatergic function、improvement of ability of the cholinerginic system and antioxidation、greatly antagonize the LTP inhibiting effects.Conclusion  The acupuncture treatment combined with DGSYS of TCM treating AD in clinic has certain scientific evidences and it is worth being popularized widely.    【Key words】  AD  acupuncture/DGSYS/NM  scop/NANO2  glutamate/QA  AchE/Ach  NO/NOS  SOD/MDA  LTP    为了揭示针刺加当归芍药散治疗阿尔茨海默症（AD）能改善大脑智能发育和精神状态的症状及可能机制［1，2］，我们设计了3种不同实验性痴呆造模方案；进行了探索性研究，不竟获得满意的结果，现将资料整理如下。    1  实验材料    1.1  动物  选用健康5～9月龄灵活性较一致SD雄性大鼠150只，由南京中医药大学实验动物中心提供，体重290±10g。    1.2  药品及试剂  当归芍药散粉剂（DGSYS）江阴天江药业有限公司生产，批号：990820。尼莫地平(NM)，山东新华制药股份有限公司生产，批号960405 。氢溴酸东莨菪碱注射液(Scop)，上海禾丰制药有限公司生产，批号960601，剂量0.3mg/ml。亚硝酸钠，浙江省兰溪市化工试剂厂，批号911113。 QA、高丝氨酸、邻苯二甲醛（OPA）为Sigma公司产品，2-巯基乙醇系AMRESCO进口分装，其他氨基酸标准品和生化试剂为国产分析纯。    2  实验方法    2.1  跳台及水迷宫测试（按中国医学科学院药物研究所DTT-2型跳台仪和SMG-2型水迷宫实验装置操作说明方法进行）。被动回避性跳台实验：药物造模10min（或术后第9 天）后进行，24h后重作测试，各组动物交叉进行；手术造模，术后第10天再次测试。水迷宫空间分辨能力实验：各组大鼠手术后第11 天在不同处理后1h进行，以进入盲端次数，到达终点所需时间及学会所需次数来衡量大鼠学习记忆能力。    2.2  实验动物分组及处理  随机分150只SD大鼠为5组，每组10只。其中针药组、针刺组用30#美容针于实验开始之日起，针刺 “百会”穴（或“大椎穴”）和“肾俞”穴［3］。“百会穴”向前平刺3～6mm，“肾俞穴”稍向内斜刺5mm，捻转后，接G6805电针仪刺激10min，连续波，频率3Hz，强度2～4mA，以大鼠肢体抖动为度，每日1次，连续7天；针药组于针刺治疗前半小时灌服DGSYS溶液5.6g/kg，药物组于治疗前半小时灌服DGSYS溶液5.6g/kg，尼莫组于治疗前半小时灌服尼莫地平混悬液10ml/kg，模型组和空白组，自实验第1天起，与针刺组同样固定和处理，每次10min，连续7天为1个疗程。在QA损毁海马CA1区所致痴呆大鼠模型中，随机对照分为假手术组、模型组、模型+针刺组、模型+药物组和模型+针药组，模型组和假手术组大鼠自手术次日开始，与针刺组同样固定和处理，各组动物每日治疗或处理1次，连续15天为1个疗程。    2.3  造模方法    2.3.1  Scop所致痴呆大鼠模型  大鼠末次训练结束1h后除空白组外，均分别腹腔注射Scop 2mg/kg，空白组腹腔注射等容量生理盐水。    2.3.2  NaNO2所致痴呆大鼠模型  操作同上，均分别给各组每只大鼠皮下注射亚硝酸钠混悬液120mg/kg。空白组腹腔注射等容量生理盐水。    2.3.3  QA损毁海马CA1区所致痴呆大鼠模型  实验大鼠腹腔注射10%水合氯醛3.5ml/kg麻醉后，参照大鼠脑立体定位图谱［4］对双侧海马CA1区定位，用牙科打磨机钻开颅骨，将充灌2%滂胺天蓝醋酸钠溶液（0.5mol/L）的玻璃微电极插入至海马CA1区（AP－2.8mm，ML±1.0mm，DV3.0mm）通以阴极电流标记位置。用10%甲醛溶液灌流、固定脑组织后，取脑，连续冠状位冰冻切片，片厚50μm，中性红染色，显微摄影放大、观察定位。对另一组实验大鼠进行微量注射器垂直进针，以0.2μl/min的速度，将已配制的2μl QA溶液缓慢注入到海马CA1区，留针5min后缓慢退出，缝合皮肤，连续肌肉注射青霉素G钠［4×104U/(kg·d)］3天，以防感染。假手术组用0.01mmol/L磷酸盐缓冲液代替QA注射于海马CA1区。实验室温度维持在22～24℃。    2.4  实验指标活性测定  氨基酸类神经递质HPLC荧光检测法。NO、NOS、SOD、LPO、蛋白质等试剂盒分别购自南京建成及聚力生物工程研究所，严格按操作说明分别测试。丙二醛（ MDA）含量测试采用硫代巴比妥酸法，NO的代谢产物NO3-和NO2-含量用硝酸还原酶法。    2.5  数据统计处理  应用SPSS10.0统计软件，单因素方差分析（ANOVA）进行比较。    3  实验结果    3.1  Scop所致痴呆大鼠学习记忆的影响［5］    3.1.1  痴呆大鼠跳台测试  见表1。    表1  各组痴呆大鼠跳台测试参数比较  (x±s)    注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，与尼莫、针刺组比较#P＜0.05    结果表明：模型组与空白组比较，测试错误次数明显增多及潜伏期明显延长，差异有非常显著性(P＜0.01)。与模型组比较，针药组、针刺组与尼莫组测试错误次数均明显减少(P＜0.05或P＜0.01)，潜伏期延长，差异有显著性(P＜0.01或P＜0.05)，说明三组虽都可改善记忆获得障碍，而针药组与针刺组、尼莫组比较，潜伏期呈有意义的明显延长(P＜0.05)，说明针药组对改善Scop所致大鼠记忆获得障碍的作用较好。    3.1.2  痴呆大鼠水迷宫法测试  水迷宫法测试50只痴呆大鼠表明，模型组每天测试的错误次数明显多于空白组、针药组、针刺组、尼莫组(P＜0.01或0.05)。治疗第一天时，针药组错误次数(3.8±0.84)、尼莫组(4.0±0.84)显著低于针刺组(5.4±1.14)，P＜0.05。处理后7天内，针药组错误次数仍然处于较低水平(

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