[本篇论文由上帝论文网为您收集整理，上帝论文网http://paper.5var.com将为您整理更多优秀的免费论文，谢谢您的支持]         马国宣 李宏芬 吴寿岭                                                                                                         【摘要】  目的  讨论ACE基因多态性及大容量肺灌洗术（WLL）对尘肺患者血清ACE浓度的影响。方法  对71例尘肺患者在全身麻醉下行WLL治疗，灌洗前后抽取静脉血，PCR方法检测ACE基因，酶两点终点法测定ACE浓度。结果  （1）71例尘肺病患者中，ACE基因Ⅱ型者35例，占49.3％，ID型者25例，占35.2％，DD型者11例，占15.5％；146例正常对照组中Ⅱ型者68例，占46.6％，ID型者54例，占37.2％，DD型者24例，占16.2％，两组基因型频率比较差异无显著性；（2）尘肺患者WLL前血清ACE浓度为43.5±13.37u/L，较对照组31.62±9.19 u/L明显增高（P＜0.01）；（3） WLL后尘肺患者血清ACE浓度为26.74±8.71u/L，较术前明显下降，且趋于正常；（4）WLL前，ID基因型血清ACE浓度最高，DD型次之，II型最低。WLL后，DD基因型血清ACE浓度最高，ID型次之。 血清ACE浓度下降程度（△ACE）以ID型最明显，为14.28±10.66u／L，DD型次之，为9.45±6.43 u／L，II型变化最小，为 7.87±5.87 u／L（P＜0.01）。结论  ACE基因多态性影响尘肺患者血清ACE浓度；WLL后患者血清ACE浓度明显下降。        【关键词】  肺灌洗；　血管紧张素转换酶（ACE）；　基因多态性　；　ACE浓度            【Abstract】  Objective  Analysis the effects on serum ACE concentration in the pneumoconiosis patients by ACE gene polymorphism and WLL .Methods  71patients were performed WLL under general anesthesia ;blood samples from the vein were taken before and after WLL; polymerize chain reaction was used to detected the ACE gene，the serum ACE was measured by the way of  enzyme two points destination.Results  （1） In the 71 pneumoconiosis group，the frequency of ACE gene II，ID，DD genotype was 49.3%，35.2%，15.5% respectively. In the control group，the frequency of ACE gene II，ID，DD genotype was 46.6%，37.2%，16.2% respectively. There was no significant difference between each genotype of the two groups. （2） Serum ACE concentration in pneumoconiosis patients before WLL were higher than that of normal people. （3） The serum ACE concentration decreased dramatically after WLL and trend to normal. （4） Before WLL，ID geneotype  serum ACE concentration was the highest，DD genotype was second，II genotype was the lowest; after WLL，DD genotype  serum ACE concentration was the highest，ID genotype was the second; △ACE of ID geneotype is the largest，14.28±10.66 u／L，DD geneotype is second，9.45±6.43 u／L，II genotype was the lowest，7.87±5.87u／L（P＜0.01）.Conclusion  Serum ACE concentration was affected by ACE gene polymorphism，and the serum ACE concentration decreased dramatically after WLL.                尘肺病是由于长期吸入含游离二氧化硅（SiO2）及其他粉尘所致的、以肺组织广泛纤维化为主的全身性疾病。大容量全肺灌洗术（whole-lung lavage，WLL）是近几年逐步成熟的一种治疗尘肺病的新技术，它可清除肺泡腔和细支气管内的粉尘、吞尘肺泡巨噬细胞（pulmonary alveolar macrophage，PAM）及其产生的致炎症、致纤维化因子，起到去除病因、改善呼吸功能、缓解症状的功效［1］。ACE基因多态性决定了人体内ACE浓度，而ACE是肾素－血管紧张素－醛固酮系统的关键酶，其下游产物－血管紧张素Ⅱ和醛固酮是已知的致炎和致纤维化因子［2，3］。本文旨在探讨ACE基因及WLL对尘肺患者血清ACE浓度的影响，分析了2004年71例行WLL的尘肺患者ACE基因多态性及其WLL前后血清ACE浓度变化，从基因水平进一步佐证了WLL治疗尘肺病的疗效。        1  资料与方法        1.1  一般资料  选择本院2004年71例住院的尘肺病患者，尘肺病诊断分期依据我国《尘肺病诊断标准》GBZ70－2002。患者均为男性，年龄28～64岁，平均50.5±8.0岁；诊断分期Ⅰ期39例，Ⅰ＋10例，Ⅱ期11例，Ⅱ＋5例，Ⅲ6例；对照组为年龄、性别相匹配的146名开滦医院健康体检者，既往无肺疾患、高血压、冠心病、脑血管疾病、糖尿病、肾病等病史。        1.2  病例选择标准  全部病例符合WLL条件［1］：肺功能检查：肺活量（VC）、最大通气量（MVV）达到预计值70％；呼气流速峰值（PEF）、用力肺活量25％～75％的最大流速（FEF 25%～75％），第一秒时间肺活量（FEF1.0），弥散功能（DLco）均达到预计值70％；动脉血氧分压（PaO2）大于9.3 kPa （70mmHg）；心、肝、肾功能及各项化验指标均正常。        1.3  标本的采集与检测  WLL前抽取外周静脉血3～5ml，2％EDTA抗凝，低渗法提取白细胞，－20℃保存，酚／氯仿法提取基因组脱氧核糖核酸（DNA），PCR方法进行基因扩增，紫外灯下观察结果。WLL前及术后1周取外周静脉血2～3ml，1500r/min离心10min，取血清－80℃保存，酶两点终点法测定ACE浓度。        1.4  PCR方法进行基因扩增  （1）引物序列：采用PCR技术对ACE基因第16内含子目的片段进行扩增。参照文献［4］设计引物，上游引物5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′，下游引物5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′；PCR反应体系：总反应体积为25μl，其中模板DNA 0.5～1μg，TaqDNA聚合酶0.6μl（5u/μl），dNTP 2μl （2.5pmol/μl），［10X］Buffer 2.5μl，MgCl2 1.5μl，引物上、下游混合物1.6μl（2.5pmol/μl），无菌双蒸水15.8μl，应用PE-9700扩增仪进行扩增；PCR循环参数：94℃预变性240s，进入循环，94℃变性50s，58℃退火50 s，72℃延伸60s，30个循环，后延伸72℃ 300s结束反应。（2） ACE基因型判定：PCR扩增产物，以2%琼脂糖凝胶进行电泳，溴化己啶染色，与Marker对照，在紫外灯下观察结果。只有一条约在490bp处出现亮带者为插入型纯合子Ⅱ型，只有一条约在190 bp处出现亮带者为缺失型纯合子DD型，两条亮带分别在490bp处和190bp处出现者为杂合子ID型（如图1）。 图1  血管紧张素转换酶（ACE）基因电泳带图1，12为Marker;2''4''7''9''10为Ⅱ型；3，6，11为ID型；5，8为DD型    1.5  血清ACE浓度测定  采用日立（7060Automatic Analyzer）全自动生化测定仪检测。        1.6  WLL常规进行［1，5］。        1.7  统计学处理  全部资料采用EXCEL建库，分别计算各组ACE基因频率与血清ACE浓度。ACE基因型各组间频率比较采用χ2检验，血清ACE浓度测定结果以均值±标准差表示，组间数据比较采用t检验，多组均数比较采用方差分析。        2  结果        2.1  尘肺患者与正常人群ACE基因I／D多态性比较  71例尘肺患者中，ACE基因Ⅱ型者35例，占49.3％，ID型者25例，占35.2％，　DD型者11例，占15.5％；146例正常对照组中ACE基因II型者68例，占46.6％，ID型者54例，占37.2％，DD型者24例，占16.2％，两组基因型频率比较差异无显著性（P＞0.05）;等位基因频率尘肺患者I：62.5%（60/96），D：37.5%（36/96），正常对照组I：65.1%（190/292），　D：34.9%（102/292），两组等位基因频率比较差异无显著性（P＞0.05），见表1。表1  尘肺组与对照组ACE基因I／D多态性基因型和等位基因频率分布比较  例（%）注：两组基因型频率比较P＞0.05，等位基因频率比较P＞0.05     2.2  尘肺患者与正常人群ACE浓度比较  尘肺患者血清ACE浓度为37.62±11.53u/L，对照组血清ACE浓度为31.62±9.19u/L，差异有显著性（P＜0.01）。        2.3  尘肺患者ACE基因多态性与血清ACE浓度关系  WLL前，ID基因型者血清ACE浓度最高，为43.5±13.37u/L，DD型者次之，为

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