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[本篇论文由上帝论文网为您收集整理，上帝论文网http://paper.5var.com将为您整理更多优秀的免费论文，谢谢您的支持]蔡 晋，李爱军，向梦生，吴丽娟，夏 季 【摘要】 目的 研究乙肝血清HBV-DNA与HBV免疫学标志物之间的相关性。方法 采用双盲实验，血清HBV-DNA采用Real-time PCR进行定量检测，血清免疫标志物采用ELISA法。结果 在344份血清标本中，HBV五项免疫学标志物出现11种组合，主要有以下5种，组合Ⅰ为HBsAg（+）、HBeAg（+）、HBcAb（+）88份，HBV-PreS1阳性率为68.18%，血清HBV-DNA阳性率为96.59%；组合Ⅱ为HBsAg（+）、HBeAb（+）、HBcAb（+）144份，HBV-PreS1阳性率为56.94%，血清HBV-DNA阳性率为50.69%；组合Ⅲ为HBsAg（+）、HBcAb（+）36份，HBV-PreS1阳性率为55.56%，血清HBV-DNA阳性率为63.89%；组合Ⅷ为HBsAb（+）41例，HBV-PreS1全部阴性，血清HBV-DNA阳性率为26.83%；组合Ⅺ为HBV-M（-）17例，HBV-PreS1全部阴性，血清HBV-DNA阳性率为11.76%。HBV的ELISA阳性模式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与荧光定量PCR结果进行独立性检验、差异性检验P值均＜0.05，即HBV的ELISA阳性模式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与荧光定量PCR结果之间存在关联性，且荧光定量PCR结果阳性率高于HBV的ELISA阳性模式。结论 血清HBV-DNA更能反映HBV复制的程度，其载量与抗原存在呈正相关性；HBV-DNA检测对乙肝早期诊断、病毒复制水平判断和疗效监测等均具有重要的临床意义。 【关键词】 HBV-DNA；Real-time PCR；ELISA；HBV-M；HBV-PreS1 【Abstract】 Objective To study the relationship between serum HBV-DNA and six types immune markers for hepatitis B virus (HBV-M).Methods Serum HBV-DNA was determined by real-time PCR assay while the six types HBV-M by ELISA method.Results Of 88 patients positive for HBsAg，HBeAg and HBcAb，the HBV-PreS1 positive rate was 68.18%，and the HBV-DNA positive rate was 96.59%.Of 144 patients positive for HBsAg，HBeAb and HBcAb，the HBV-PreS1 positive rate was 56.94%，and the HBV-DNA positive rate was 50.69%.Of 36 patients positive for HBsAg and HBcAb，the HBV-PreS1 positive rate was 55.56%，and the HBV-DNA positive rate was 63.89%.Of 41 patients positive for HBsAb，the HBV-PreS1 positive rate was 0，and the HBV-DNA positive rate was 26.83%.Of 17 patients negative for the HBV-M，the HBV-PreS1 positive rate was 0，and the HBV-DNA positive rate was 11.76%.The results of HBV-DNA fluorogenic quantitative PCR were significantly correlated with the positive models Ⅰ，ⅡandⅢ of HBV(P<0.05)，and the positive rates of HBV-DNA fluorogenic quantitative PCR were significantly higher than the rates of positive models Ⅰ，Ⅱand Ⅲ of HBV(P<0.05).Conclusion There was a positive good correlation between carrying capacity of serum HBV-DNA and the antigens content.Serum HBV-DNA determination can be used to monitor the true state of HBV infection and replication，and it is useful for judging effectiveness of anti-virus treatment. 乙型肝炎病毒（HBV）是乙型肝炎的病原体，HBV感染的诊断指标主要有HBV-DNA和血清标志物HBV-M（即乙肝六项免疫标志物:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HBV-PreS1）等。本文对以上标志物进行检测分析，以探讨血清HBV-DNA与免疫标志物的相关性、符合性和补充性，从而进一步证实HBV-DNA检测在乙肝早期诊断、传染性识别、病毒复制水平判断以及抗病毒治疗效果监测中的地位和价值。 1 材料与方法 1.1 标本来源 2004年5月25日～9月17日收集的在大坪医院就诊的病人血清样本344份。 1.2 试剂与方法 1.2.1 HBV-DNA检测 采用Real-time PCR法检测，试剂盒由中国深圳匹基生物工程股份有限公司提供，扩增仪为美国BIO-RAD公司生产的Icycler Real-time PCR扩增仪，检测方法严格按照试剂盒说明书操作。 1.2.2 HBVM检测 采用ELISA法检测，试剂盒由中国兰州标佳生物技术有限公司提供，采用意大利AMP全自动酶免分析仪进行检测，检测方法严格按照试剂盒说明书操作。 1.2.3 HBV感染临床诊断标准 （1）HBsAg阳性＞6个月；（2）血清HBV-DNA＞105copies/ml；（3）持续或间歇的ALT/AST水平升高；（4）肝活组织检查显示慢性肝炎（坏死炎症Knodell积分≥4分）（可选项）。 2 结果 344份病人血清标本同时做免疫标志物及HBV-DNA检测，HBV五项免疫学标志物出现11种组合，与HBV-PreS1、血清HBV-DNA阳性结果的比较，见表1。表1 HBV的ELISA阳性模式与荧光定量PCR结果 份（%） 3 讨论 3.1 HBV的ELISA阳性模式Ⅰ与荧光定量PCR结果 见表2。 3.1.1 独立性检验 χ2=11085.28，P＜0.05。HBV的ELISA阳性模式Ⅰ与荧光定量PCR结果之间存在关联性。 3.1.2 差异性检验 χ2=105.41，P＜0.05。HBV的ELISA阳性模式Ⅰ与荧光定量PCR结果之间存在差异性，荧光定量PCR结果阳性率高于HBV的ELISA阳性模式Ⅰ，血清HBV-DNA平均含量为3.76×108copies/ml，见表2。表2 HBV的ELISA阳性模式Ⅰ与荧光定量PCR结果 （份） 88例HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性患者血清HBV-DNA的阳性率高达96.59%，血清HBV-DNA平均含量为3.76×108copies/ml。独立性检验提示ELISA阳性模式Ⅰ与荧光定量PCR的结果是相互关联的，二者具有相似的流行病学意义，同时，差异性检验也反映了荧光定量PCR结果阳性率更高，更能直接体现HBV的复制程度。 3.2 HBV的ELISA阳性模式Ⅱ与荧光定量PCR结果 见表3。 3.2.1 独立性检验 χ2=105.75，P＜0.05。HBV的ELISA阳性模式Ⅱ与荧光定量PCR结果之间存在关联性。 3.2.2 差异性检验 χ2=15.76，P＜0.05。HBV的ELISA阳性模式Ⅱ与荧光定量PCR结果之间存在差异性，荧光定量PCR结果阳性率高于HBV的ELISA阳性模式Ⅱ，血清HBV-DNA平均含量为8.63×104copies/ml，见表3。表3 HBV的ELISA阳性模式Ⅱ与荧光定量PCR结果 （份） 144例HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性患者血清HBV-DNA的阳性率高达50.69%，血清HBV-DNA平均含量为8.63×104copies/ml。随着HBeAg消失、HBeAb的出现，荧光定量PCR的阳性率、HBV-DNA的拷贝数均降低，说明HBeAb出现后，病毒的复制减弱，传染性减低，但并非HBeAb阳性血清中就没有HBV，应当重视HBeAb阳性的产生与HBV病毒的消失是一个动态过程［1］。独立性检验提示ELISA阳性模式Ⅱ与荧光定量PCR的结果是相互关联的，同时，差异性检验也反映了荧光定量PCR结果阳性率更高，HBV-DNA较HBV-M特异性更强、敏感性更高，更能直接反映HBV-DNA的复制。 3.3 HBV的ELISA阳性模式Ⅲ与荧光定量PCR结果 见表4。 3.3.1 独立性检验 χ2=22.72，P＜0.05。HBV的ELISA阳性模式Ⅲ与荧光定量PCR结果之间存在关联性。 3.3.2 差异性检验 χ2=140.82，P＜0.05。HBV的ELISA阳性模式Ⅲ与荧光定量PCR结果之间存在差异性，荧光定量PCR结果阳性率高于HBV的ELISA阳性模式Ⅲ，血清HBV-DNA平均含量为4.84×107copies/ml，见表4。表4 HBV的ELISA阳性模式Ⅲ与荧光定量PCR结果 （份） 36例HBsAg、HBcAb阳性患者血清HBV-DNA的阳性率高达63.89%，血清HBV-DNA平均含量为4.84×107copies/ml，这与文献［2］报道HBeAg阴性的患者仍有半数以上可检出HBV-DNA是一致的。说明HBeAg与HBV-DNA的变化并不一致，因此不能仅以ELISA法测定血清HBeAg阴性就确定HBV在体内无复制现象，而要以敏感性较高的荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量水平，才能更确切地判断HBV复制状况。独立性检验提示ELISA阳性 [1] [2] 下一页
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