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[本篇论文由上帝论文网为您收集整理，上帝论文网http://paper.5var.com将为您整理更多优秀的免费论文，谢谢您的支持] 作者：贠 军，王 岭，易 军，王 廷，王 辉，李晓军，张聚良【摘要】 目的 探讨抗凋亡基因bag-1和bcl-2在乳腺癌组织中的表达及意义，了解肿瘤细胞凋亡的特点。方法 采用免疫组化SABC法观察了100例乳腺癌与10例乳腺良性肿瘤及10例正常乳腺组织的石蜡标本切片中bag-1和bcl-2 的表达，并进行统计研究。结果 Bag-1在乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤中，正常乳腺组织中阳性表达率分别为85.0%、10.0%、10.0%，差异有显著性（P<0.05），其表达与不同病理类型及临床分期无关（P>0.05）。bcl-2在乳腺癌组织、乳腺良性肿瘤、正常乳腺组织中阳性表达率分别为46.0%、80.0%、90.0%，差异有显著性（P<0.05）。其表达与不同病理类型及临床分期亦无关（P>0.05）。 对100例乳腺癌进行随访，bag-1阳性表达者5年生存率为78.7%，bag-1阴性表达者5年生存率为8.5%，两者差异有显著性（P<0.05）。bcl-2阳性表达者5年生存率为43.6%，bag-1阴性表达者5年生存率为46.8%，两者差异无显著性（P>0.05）。结论 bag-1在乳腺癌组织中高表达， bcl-2在乳腺癌组织中低表达，bag-1、 bcl-2在乳腺癌组织中的表达与肿瘤的临床分期、病理分型等无关。bag-1阳性表达者预后好，而bcl-2的表达与预后无关。 【关键词】 bag-1；免疫组化；乳腺癌；细胞凋亡；预后 【Abstract】 Objective To evaluate bag-1 and bcl-2 expressions in breast cancer and to evaluate its clinical significance.Methods Bcl-2 and bag-1 expressions were studied by immunohistochemstry Streptavidin-Biotin-Peroxidase Complex (SABC) methods in 100 samples of breast cancer tissues and in 10 normal breast tissues and in 10 benign tumor tissues， and their clinical significance were analysed.Results The positive rate of bag-1 expression among breast cancer ， benign tumor and normal tissues were 85.0%，10.0%，10.0% respectively，and significant difference were observed (P<0.05). However， the positive rate of bag-1 expression are not related to the pathologic grades and the different clinical type(P>0.05). The positive rate of bcl-2 expression among breast cancer ， benign tumor and normal tissues were 46.0%，80.0%，90.0% respectively，and significant difference were observed (P<0.05). The positive rate of bcl-2 expression is not related to the pathologic grades and the different clinical type (P>0.05).Following up the 100 breast cancer patients，we know that 5-year survival rate of bag-1 positive is 78.7%，and the negatives is 8.5%，significant difference were observed (P<0.05). 5-year survival rate of bcl-2 positive is 43.6%，and the negatives is 46.8%，no significant difference is observed (P>0.05).Conclusion There is an overexpression of bag-1 and lower expression of bcl-2 in breast cancer. The positive rates of bcl-2 and bag-1 expression are not related to the pathologic grades and the different clinical type . The overexpression of bag-1 may be related to a longer survival time and a higher survival rate. The positive rate of bcl-2 is not related to the prognosis of breast cancer. 【Key words】 bag-1； immunohistochemistry； breast cancer ；apoptosis； prognosis 乳腺癌是影响妇女最常见的恶性肿瘤，大量研究表明癌基因的激活、抑癌基因的失活、生长因子受体的激活等在其发生、发展中具有重要意义、凋亡障碍及其机制是肿瘤学研究的一个热点。研究这些基因在肿瘤中的表达及相互作用，对于揭示肿瘤发生、发展的机制有着十分重要的意义。bag-1是一种已经被确认的多功能结合蛋白，它具有与bcl-2形成复合物，而促进抗细胞凋亡的能力［1］。笔者采用免疫组化染色方法观察了100例乳腺癌中bag-1与bcl-2的表达情况并就其意义进行了初步讨论。 1 材料与方法 1.1 标本来源 收集1995年5月～2000年5月手术切除的乳腺癌石蜡包埋组织块100例，均来自我院病理科存档标本，标本均经过40g/L多聚甲醛灌注固定，常规石蜡包埋连续切片，厚约4μm，标本供者年龄32～67岁，平均47.1岁。其中导管癌62例，小叶癌33例，特殊型癌5例。按UICC TNM分期：Ⅰ期32例，Ⅱ期51例，Ⅲ期17例。同时选择10例乳腺良性肿瘤和10例正常乳腺组织石蜡标本作为对照。 1.2 试剂 兔抗人bag-1抗体由加拿大Dr. H. Bliss Murphy癌症中心赠送，SABC免疫试剂盒及兔抗人bcl-2抗体购自武汉博士德公司。抗bcl-2及抗bag-1抗体的工作浓度1∶50，生物素化单抗和SABC试剂的工作浓度均为1∶100。 1.3 方法 参照SABC说明书进行。（1） 石蜡组织切片常规二甲苯脱蜡，系列酒精处理后充分水洗。（2） 9g/L 甲醇-过氧化氢室温孵育5min，PBS（pH 0.01）洗5min重复3次。（3）3g/L胰蛋白酶溶液，37℃消化30min。PBS洗5min重复3次。（4）1∶50正常羊血清封闭20min。（5）加入PBS稀释的一抗，37℃温育2h ，PBS洗5min重复3次。（6）1∶100稀释生物素化二抗37℃温育60min，PBS洗5min重复3次。（7）临用前配制SABC，PBS 1ml加入A液10μl和B液10μl，混匀后加至切片。37℃温育30min，PBS洗5min重复3次。（8）DAB显色：PBS 100ml中加入DAB 25mg。加300ml/L H2O2 50μl，室温显色3min，自来水充分洗。（9）Mayor苏木精复染30s，PBS泡直至切片变蓝，自来水充分洗。（10）蒸馏水洗2min重复3次。常规脱水，透明，中性树胶封片。光学显微镜（Olympus BH-2）镜检。对照实验用同等稀释度的正常家兔血清及PBS替代一抗作为替代及阴性对照，其他实验步骤不变。 1.4 判定标准 在10×40倍光镜下随机观察5个视野，计算其平均数，每个视野计数100个细胞。bag-1胞浆胞核棕黄色染色为阳性染色，bag-1阳性细胞<10%为低表达（+），10%～30%为中度表达（++），>30%为高表达（+++）。bcl-2胞浆出现棕黄色染色为阳性， bcl-2染色阳性细胞<30%为低表达（+），30%～50%为中度表达（++），>50%为高表达（+++）。 1.5 统计学方法 阳性表达率比较用χ2检验；bcl-2、bag-1与预后的关系用Fisher精确概率法检验分析。 2 结果 2.1 bcl-2与bag-1在乳腺癌及正常组织中的表达 2.1.1 bag-1的表达 bag-1蛋白表达在癌细胞的胞膜、胞浆上呈棕黄色颗粒。bag-1在10例正常组织中只有1例阳性表达，阳性率为10.0%，而在乳腺癌组织中的阳性表达有85例，占85.0%，χ2检验，两者差异有显著性（P<0.05）。 比较bag-1在乳腺癌不同病理类型中的表达，在62例导管癌中，阳性53例（85.5%）；小叶癌33例中，阳性28例(84.8%)；特殊型癌5例中，阳性4例 (80.0%)。统计分析表明：3种乳腺癌中bag-1的表达率差异无显著性（χ2检验，P>0.05）。即表明bag-1的表达与乳腺癌病理分型关系不大，见表1。 2.1.2 bcl-2的表达 10例正常组织中，阳性9例，阴性1例，阳性率90.0%。阳性细胞多分布在细胞浆上，呈棕黄色颗粒。100例乳腺癌组织中，阳性46例，阴性54例，阳性率46.0%， bcl-2蛋白主要表达在癌细胞的胞浆及核膜，呈棕黄色颗粒。乳腺癌组织中bcl-2表达明显低于正常组织，χ2检验，两者差异有显著性（P<0.05）。比较bcl-2在乳腺癌不同病理类型中的表达，在62例导管癌中，阳性29例（46.8%），小叶癌33例中，阳性15例(45.5%)，特殊型癌5例中，阳性2例 (40.0%)。统计分析表明：3种乳腺癌中bcl-2的表达率差异无显著性 [1] [2] [3] 下一页
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