微波诱变法选育四环类抗生素菌种的探索和应用 - 免费论文，论文大全,个人简历,英语学习,教案在线,实用文档,演讲发言

首页用户登录 |

用户注册

设为首页

加入收藏

联系我们

按字母检索

按声母检索

数字

符号

您的位置： 5VAR论文频道 → 论文中心 → 医学论文 → 临床医学

微波诱变法选育四环类抗生素菌种的探索和应用

热 ★★★

【字体：

小

大】

微波诱变法选育四环类抗生素菌种的探索和应用

收集整理：佚名来源：本站整理时间：2012-07-01 14:13:44 点击数：[]

[本篇论文由5var5VAR论文频道为您收集整理，5VAR论文频道http://paper.5var.com将为您整理更多优秀的免费论文，谢谢您的支持]

作者：陈红王春魁郭娜王丽武芳

【摘要】 采用微波诱变法处理四环类抗生素生产菌种——生金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)。当微波功率1200W、脉冲频率2450MHz时，辐照4s诱变效果最明显。01217菌株处理后得414#菌株。该菌株特性优良，15m3发酵罐试验，37批平均发酵效价高于对照菌株5.9%。处理另一株四环类抗生素生产菌种44#，选育出27#菌株，摇瓶复试效价高于对照10.5%以上。

【关键词】 四环类抗生素；微波；诱变；发酵；生金色链霉菌

微波在生物学上主要用于杀菌、刺激植物种子发芽生长［1］。随着人们对微波的生物学效应及微生物特点认识的深入，微波在工业微生物诱变育种中也应用得越来越广泛［2］，与紫外线、离子注入、抗癌药物、染料等方法处理菌种相比较，微波处理法具有操作简单、费用低、安全性高、对环境污染小等特点。本试验探索了微波对四环类抗生素生产菌种——生金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)的诱变效应。

1 材料与方法

出发菌株为01217和44#(四环类抗生素生产菌株)。

1.2 培养基

四环类抗生素菌种选育常规培养基。

1.3 诱变处理及筛选方法

(1)孢子悬液的制备向生长好的出发菌株茄瓶斜面中加15ml无菌水，制成孢子悬液，移入一含有20个玻璃珠的三角瓶中，摇床振摇30min，过滤、稀释。

(2)诱变处理

单次处理取10-1稀释液10ml，放入玻璃试管中在微波炉中处理。微波诱变采用微波炉最大功率1200W，脉冲频率2450MHz，以辐照不同的时间对孢子进行诱变处理。

累积处理取10-1稀释液10ml，放入玻璃试管中在微波炉中处理，处理不同时间后冰水冷却1min继续处理。处理采用微波炉最大功率1200W，脉冲频率2450MHz，以辐照不同的时间对孢子进行诱变处理。

(3)稀释分离将处理过的孢子液稀释至10-5，取每个稀释度的0.1、0.3和0.5ml孢子液涂平板，最适温度培养至长好。

(4)摇瓶筛选挑选单菌落接于斜面培养基上，最适温度培养好后，挖块接母瓶、发酵瓶，摇床振荡培养7d后放瓶测定化学效价。挑选高效价菌株埋砂土管，进行摇瓶复筛、特性考察。

(5)效价检定

化学检定方法样品用盐酸酸化后，经滤纸过滤取滤液，用纯化水适当稀释后，加显色剂显色，在可见光的固定波长下检测，根据吸光度强弱计算效价(方法出自华北制药SOP106生化57)。

2 结果与分析

2.1 微波的诱变效应

微波诱变菌种辐照时间分别为3、4、5和7s，统计正变率和死亡率。结果显示，微波处理时间4s时菌种正变率最高，为较好的选择，这时的死亡率一般在30%左右。随着处理时间的延长死亡率增加，正变率反而下降。在平板分离培养基上分离单菌落，菌落形态变异率较小。对由01217为出发菌种获得的单菌落进行摇瓶初筛，选出6株菌进行摇瓶复筛，其中最高的一株效价比对照高7.1%，菌号定为414#(表1)。

2.2 微波的累积诱变效应

微波诱变菌种首次辐照时间分别为3、4、5和7s，之后用冰水冷却，1min后继续分别处理3、4、5和7s，统计正变率和死亡率。

微波累积处理生金色链霉菌，时间仍以4s时菌种正变率最高，为较好的选择，但与单次微波处理相比，微波累积处理整体效果稍差。在以上累积处理条件下，死亡率在20%～85%之间，死亡率并没有随处理总时间的加倍而成倍增长。在平板分离培养基上分离单菌落，菌落形态变异率仍较小。对由另一株生金色链霉菌表1微波处理后摇瓶复筛效价44#为出发菌种获得的单菌落进行摇瓶初筛，选出4株菌进行摇瓶复筛，其中最高的一株发酵效价比对照高10.5%，菌号定为27#。

2.3 菌种遗传特性研究

对414#菌株及对照菌株、27#菌株及对照菌株进行代谢考察。将菌种分别接发酵摇瓶，在培养72h后每日取样测pH、C、N及摇瓶效价。结果414#菌株糖氮代谢均快于对照菌株，pH变化与对照菌株相近，放瓶效价比对照高14.5%；27#菌株糖氮代谢稍快于对照菌株，pH变化比较平稳，放瓶效价高于对照9.2%。

414#和27#菌株传至二代、三代砂土孢子时，摇瓶效价与原菌株基本持平。

2.4 生产试验结果

414#菌株在15m3生产罐上进行试验，表现为氨氮代谢快、起步效价高、后劲足、放罐体积大的特点。统计半年试验结果，414#菌株37批，对照菌株44批，平均发酵效价前者高于后者5.9%。现已全面推上生产。随着工艺优化，该菌株发酵效价逐步提高，多次创单罐批发酵效价历史最高记录和月平均效价历史最高记录，取得了显著的经济效益。

3 结论

微波处理诱变效果不亚于传统理化因子。本文对四环素产生菌株01227和44#菌株处理后414#菌种的发酵效价明显高于对照菌种。

27#菌种还有待上生产罐检验

【参考文献】
［1］梁海曼，周菊华. 热击在植物组织培养的应用前景［J］. 广西植物，1992，12(1)：64～75.

［2］李永泉，贺筱蓉. 微波诱变和激光诱变相结合选育金霉素链霉菌的研究［J］. 生物工程学报，1998，14(4)：445～448.

Tags：

文章转载请注明来源于：5VAR论文频道 http://paper.5var.com。本站内容整理自互联网，如有问题或合作请Email至:support@5var.com
或联系QQ37750965

提供人：佚名
	上一篇文章：微波法快速提取丝状真菌基因组DNA 下一篇文章：头孢克洛和头孢克肟治疗小儿急性细菌性肠炎疗效观察
【返回上一页】【打印】【关闭窗口】

中查找“微波诱变法选育四环类抗生素菌种的探索和应用”更多相关内容	5VAR论文频道
中查找“微波诱变法选育四环类抗生素菌种的探索和应用”更多相关内容	5VAR论文频道

最新热点		最新推荐		相关新闻
››先天性尿道下裂治疗现状 ››对腋臭治疗的临床研究 ››两药加营养支持治疗慢性肺心病并心... ››蓝芩口服液治疗放射性咽喉炎的疗效... ››探讨健康教育对抑郁症患者的效果 ››○先天性肾发育不良与分子生物学的... ››脑电图在老年人癫痫发作中的应用及... ››运城市艾滋病防治宣传的思考 ››创伤救治中容易但不容忽略的若干问... ››如何看待临床应急用血行为				››微波诱变法选育四环类抗生素菌种的...

　文章-网友评论：（评论内容只代表网友观点，与本站立场无关！）