。 在SDA的临床应用方面,Down等和Ichiyama等人进行了一些有益的探索。Down等采用化学发光的方法对294例临床收集的痰标本进行了TBIS6110的检验,并根据校正曲线换算成相应的结核杆菌数目[12]。他们得出的初步结论是SDA可用于临床标本的结核杆菌检测。Ichiyama等人做了SDA与PCR和培养法检测结核杆功物临床对比实验[13]在用SDA、PCR和培养法对299位病人的530例痰标本进行结核杆菌检验的实验中,以细菌培养法作参考,SDA灵敏度为94.7%,PCR的灵敏度为89.5%,PCR的特异性为100%。Ichiyama等据此认为,在临床上检测痰标本中的结核杆菌方面,SDA应当是一种很有用的方法。 4 SDA的不足 一是SDA产物不均一。由于在SDA循环中总要产生一些不同的单、双链产物,这使得用电泳法检测SDA扩增产物时必然要出现拖尾现象。尽管有不少学者试图通过调节钙、镁离子浓度以及酶的用量来改善[7],但由于这是SDA的必然产物,目前的技术不可能根本消除。二是SDA产物的两端必然带有所用核酸内切酶的识别序列或其残端,因而SDA产物不可能直接用于克隆。这使得SDA在基因工程方面没有优势。三是目前SDA产物的检测手段尚不够如意。目前SDA产物检测的主导方法是荧光偏振检测法。但该检测方法需要特殊仪器——荧光分光光度计,这限制了SDA在临床的广泛应用。另外,SDA可能因标本中含有不明抑制物,使检测不能反映标本中靶DNA的真实含量。复合DNA中高含量靶DNA对低含量靶DNA的竟争抑制现象也很常见。 5 SDA的应用前景 如前所述,对SDA检测技术的研究已有取得可喜的成绩。嗜热SDA的建立并与FP结合,使高灵敏度、快速特异的SDA检测成为现实。最近,Mehrpouyan等人用SDA检测HIV-1 rNA获得成功[14],这说明SDA可用于所有核酸的检测。总之,虽然SDA尚有不如人意的地方,但随着其不断迅速发展,可以相信,SDA将成为临床疾病的诊治和科学研究的有用手段。 参考文献 1 Walker GT,Fraiser MS,Schram JL,et al.Nucleic Acids res,1992;20(7):1691-6 2 Walker GT,Nadeau JG,Spears PA,et al.Nucleic Acids res,1994;22(13):2670-7 3 Walker GT,Nadeau JG,Linn CP,et al.Clin Chem,1996;42(1):9-13 4 Walker GT,Nadeau JG amd Linn CP.Mol cell-Probes,1995;9(6)399-403 5 Walter NG.J Mol Biol,1995;254(5):856-68 6 Little MC,Sears PA and Shank DD.Mol Cell probes,1994;8(5)375-84 7 Zwadyk P Jr,Down JA,Myers N,et al.J Clin microbiol,1994;32(9)2140-6 8 Walker GT,Linn CP and Nadeau JG.Nucleic Acids res,1996;24(2)348-53 9 Walkdr GT and Linn CP.Clin Chem,1996;42(10):1604-8 10 Spears PA,Linn CP,Woodard DL,et al.Anal biochem,1997;247(1):130-7 11 Spargo CA,Fraiser MS,Van Cleve M,et al.Mol Cell probes,1996;10(4):247-56 12 Down JA,O’Connell MA,Dey MS,et al.J Clin microbiol,1996;34(4)860-5 13 Ichiyama S,Ito Y,Sugiura F,et al.J Clin microbiol,1997;35(12):3082-5 14 Mehrpouyan M,Bishop JE,Ostrerova N,et al.Mol Cell probes,1997;11(5):337-47 上一页 [1] [2]
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